AChRAb試劑盒的測定涉及多個關鍵環節,包括嚴格的樣本前處理、準確的加樣操作、適時的顯色終止以及科學的數據解析。使用時需特別注意環境因素對試劑穩定性的影響,并嚴格遵循說明書中的標準化流程。
1.環境控制
-室溫平衡:試劑盒從冷藏環境中取出后必須充分恢復至室溫再使用,否則可能影響實驗結果的準確性。未用完的板條應重新密封保存,防止受潮或污染。
2.操作規范
-避免結晶干擾:濃洗滌液若出現結晶析出,可在水浴中輕微加熱助溶,但需確保不影響檢測結果。
-嚴格遵循說明書:不同批次的產品可能存在差異,如檢測限、靈敏度及顯色時間等參數均以隨附說明書為準,不可直接套用其他批次的經驗值。
3.樣本處理細節
-稀釋一致性:待測樣本的稀釋倍數需嚴格按照方案執行,以保證數據的可比性。
-混勻充分性:添加試劑時務必充分混勻,避免局部濃度過高或過低導致假陽性/假陰性結果。
4.質量控制
-雙孔平行實驗:建議對關鍵樣本進行復孔檢測,以提高結果可靠性。
-動態監測顯色進程:顯色時間過長可能導致本底升高,需根據實際顯色情況及時終止反應。
5.安全性管理
-個人防護裝備佩戴:操作過程中應穿戴實驗服、手套等防護用品,避免接觸有害化學物質。
-廢棄物規范處置:使用后的耗材和液體廢物應按實驗室生物安全規定分類處理。
AChRAb試劑盒原理:
1.固相載體包被:使抗原或抗體結合到某種固相載體表面(如微孔板),并保持其免疫活性。在中,通常是用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體。
2.酶標記物制備:將抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。例如,會使用HRP標記的抗體。
3.樣本反應:在測定時,把受檢標本和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。對于AChRAb試劑盒,往包被單抗的微孔中依次加入樣品,再與HRP標記的抗體結合,形成抗體 -抗原 -酶標抗體復合物。
4.洗滌分離:用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,以確保后續檢測結果的準確性。此時,結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。
5.顯色反應:加入酶反應的底物后,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關。比如加入底物TMB,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成的黃色。可根據顏色反應的深淺進行定性或定量分析。